使用动态光散射和Coulter原理的粒子表征

脂质体是直径50nm至5μm的特殊脂质囊泡。脂质体在许多行业中具有广泛的应用范围，包括化妆品，纺织品，医学行业和生物学研究。

从质量角度(克/升)和计数角度(粒子/升)确定脂质体的准确浓度可以帮助医疗工业中治疗性化合物的精确剂量。yabo214在仿生系统中，确定脂质体的总数对于高效和功能性地将膜蛋白重建成脂质体至关重要。综合技术包括沉降、筛分和光散射(动态和静态)。

离散表征技术包括电子显微镜、光学显微镜和库尔特原理。沉降和筛分技术的准确性非常有限，每次测量都需要很长时间。

DLS有助于测量样品的平均直径和多分散性，然而作为集合技术，集中信息从根本上无法使用。离散技术，例如电子和光学显微镜，可提供精确的尺寸和颗粒形状。yabo214使用DLS的Coulter原理提供额外的细节以及浓度，同时验证从DLS衍生的严格，逐个粒子的尺寸信息。

方法

Delsamax核心分析

Librede，一家脂质开发的领先公司购买了脂质体。在生产的三周内，脂质体进行了分析。脂质体由脂质型DPhPC(1,2-二植酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱)制成;悬浮缓冲液由150mm NaCl, 5mM CaCl组成₂，10mm hepes和ph8.0。初始浓度为0.8mg / ml。

对DLS进行分析DelsaMax核心，脂质体在去离子水亚微米过滤水中稀释为1:100，最终浓度为0.008 mg/mL，在一次性环状聚烯烃试管中分析，使用20µl的样品。脂质体样品运行5次;每次运行包括3个持续5秒的收购/收购。电池温度设定为25℃。

适用于所有样品的平方和平方（SOS）小于10，表示清洁样品，没有灰尘或气泡的任何污染。报告的直径和多分散性来自累积分析，它假定单态曲面样本，正则化分析（图2中所示的代表数据）表明样品是单峰的。

Delsamax核心的分析只需一秒钟，并且可以容易地从MS4E验证尺寸数据，如图2所示。在320.2±19.8nm，非常接近地报告Delsamax核心中的脂质体的平均直径。从MS4E（343nm）的脂质体的平均直径和大于MS4e的中值尺寸（292nm）的平均直径示于表1中。

在图1中，颗粒尺寸绘制在宽度小于10 nm的容器中。在直径范围(x轴)总共有400个箱子。表1。两种报道的平均直径均在10%以内，支持每种颗粒表征方法的准确性

图1所示。脂质体的差异数量。图片信用：Beckman Coulter

图2。动态光散射测量DphPC脂质体的平均直径。图片信用：Beckman Coulter

Delsamax Pro分析

对Librede的DPhPC脂质体进行了分析Delsamax Pro，提供同时尺寸和Zeta潜力。为了比较，来自Lypo-SpheriC TM的通用脂质体也在水中稀释并运行。

在与上述（0.008mg / ml）的相同条件下，晶沸性脂质体在与水中的〜0.05mg / ml的水中进行。将样品注入流动细胞（〜200pl /样品），并分析每种样品共五次。Zeta电位收集期为20秒，在此期间收集DLS数据（10次运行，2 s /运行）。所有样品在25℃下运行。图3示出了代表尺寸和Zeta电位，而定量数据如表2所示。

表格1。两种报道的平均直径均在10%以内，支持每种颗粒表征方法的准确性。

来自Coulter原理（MS4E）和动态光散射的数据的比较（Delsamax核心）
仪器	技术	平均直径	中位数直径	多分散性
DelsaMax核心	动态光散射	320.2 + 19.8nm	N/A	42.0 + 8.2海里
MS4E.	库尔特原理	343 + 174nm	292nm.	N/A

表2。注意，来自Librede的挤出脂质体具有更小的多分散性，表明样品的尺寸更均匀。

来自Libo-Spheric TM和Librede提供的含有Libo-Spheric TM和挤出脂质体的数据的比较
类型	平均直径	Polydisperity	电动电势
DphPC脂质体	307.4 + 2.6海里	47.8 + 16.2nm	-68.01 + 3.1mv.
仿制性脂质体	494.8 + 60.4nm	141.2 + 17.2nm	-99.94 + 3.03mv.

图3。普通脂质体与Dphpc挤出脂质体对Delsamax Pro的比较。（a）来自所有31个Zeta潜在探测器的原始迁移率数据用于DphPC脂质体的潜在探测器;（b）来自所有31个Zeta电位检测器的原始迁移率数据用于通用脂质体（c）两种脂质体的直径比较。注意，在通用脂质体中清楚地存在较大的yabo214颗粒。图片信用：Beckman Coulter

多学器4E Coulter计数器分析

用同样的脂质体溶液Delsamax核心分析用于Multisizer 4e分析。用ISOTON II稀释剂(Beckman Coulter, Inc.)稀释脂质体，并在Multisizer 4e仪器上进行稀释，该仪器配有10µm孔径。

用19.995ml等室II（1：4,000稀释）稀释5μl库存脂质体溶液（0.8mg / ml）。安装了10μm孔，分析，分析范围为0.2-6μm，具有400尺寸的箱子对数间隔开。为了确定脂质体摩尔性，分析以体积模式运行，共分析10μL样品。进行了十个独立的运行。

讨论

Multisizer 4e COULTER COUNTER (MS4e)具有基于库尔特原理的任何仪器中最大的动态范围，从200 nm到1600 μ m。通过逐粒分析整个样本，任何异常值都可以很容易地检测和量化。

由于MS4e数字采集并保存脉冲高度和宽度数据，因此可以对任意宽度的分析进行再分析。这样，用户可以放大一个感兴趣的区域，让颗粒仓的直径小于0.1nm，如图4所示。

图4。鉴于MS4E数据的缩小视图。因为脉冲数据被数字上保存，所以可以重新计算粒度箱宽度以具有所需的任何宽度，最小宽度小于0.1nm / bin。在该图中，显示来自235nm至240nm的脂质体颗粒的百分比。yabo214图片信用：Beckman Coulter

这些信息已经从贝克曼库尔特公司提供的材料中获得，审查和改编。亚博网站下载

有关此来源的更多信息，请访问Beckman Coulter，Inc。 - 粒子尺寸表征．